2 × GC მდიდარი PCR მიქსი

მაღალი ერთგულების PCR MasterMix შაბლონებისთვის მაღალი GC შინაარსით.

ეს პროდუქტი არის 2 × MasterMix, რომელიც შეიცავს Taq Plus დნმ პოლიმერაზას, dNTPs, MgCl2, რეაქციის ბუფერს, PCR გამაძლიერებელს, ოპტიმიზატორს და სტაბილიზატორს. მას აქვს სწრაფი ამპლიფიკაციის სიჩქარის, სიმარტივის, მაღალი მგრძნობელობის, ძლიერი სპეციფიკის, კარგი სტაბილურობისა და სხვათა უპირატესობები და შეუძლია ოპერაციული შეცდომების მაქსიმალურად შემცირება. იგი შესაფერისია PCR რეაქციებისთვის მაღალი ერთგულებით და რთული სტრუქტურების მქონე შაბლონების გამაძლიერებლად, როგორიცაა მაღალი GC შემცველობა და მეორადი სტრუქტურა. მას შეუძლია ეფექტურად გააძლიეროს 20 კბ -მდე ფრაგმენტი მარტივი შაბლონებით და 10 კბ -მდე ფრაგმენტები რთული შაბლონებით.

Კატა. არა შეფუთვის ზომა
4992794 500 μl
4992795 500 μl

პროდუქტის დეტალი

ხშირად დასმული კითხვები

პროდუქტის წარწერები

მახასიათებლები

Target სამიზნე ფრაგმენტების მაღალი ეფექტურობა მაღალი GC შემცველობით: ოპტიმიზირებული ბუფერული სისტემა და უნიკალური ფორმულა გამოსადეგია GC მაღალი შემცველობის მქონე შაბლონების დნობისათვის, მაქსიმალურად გაზრდის პოლიმერაზის გამაძლიერებელ ეფექტურობას (GC%: 60%-75%).
Very ძალიან ეფექტურია რთული შაბლონებისა და შაბლონებისათვის მეორადი სტრუქტურით.
■ მაღალი ერთგულება: მაღალი ერთგულების პოლიმერაზა მიღებულია PCR MasterMix– ში, რათა უზრუნველყოს გაძლიერების სიზუსტე.
Efficiency მაღალი ეფექტურობის, სუპერ ძლიერ და სტაბილურ პრემიქს სისტემას შეუძლია შეამციროს ოპერაციის შეცდომა.

ყველა პროდუქტი შეიძლება მორგებული იყოს ODM/OEM– ისთვის. Დეტალებისთვის,გთხოვთ დააწკაპუნოთ მორგებულ სერვისზე (ODM/OEM)


  • წინა:
  • შემდეგი:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Q: არ არის გამაძლიერებელი ზოლები

    A-1 შაბლონი

    ■ შაბლონი შეიცავს ცილის მინარევებს ან Taq ინჰიბიტორებს და სხვ. —— გაასუფთავეთ დნმ შაბლონი, ამოიღეთ ცილის მინარევები ან ამოიღეთ დნმ შაბლონი გამწმენდი ნაკრებებით.

    Temp შაბლონის დენატურაცია არ არის სრულყოფილი —— სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

    ■ შაბლონის დეგრადაცია —— შაბლონის ხელახლა მომზადება.

    A-2 პრაიმერი

    Prim პრაიმერების დაბალი ხარისხი-პრაიმერის ხელახალი სინთეზი.

    ■ პრაიმერის დეგრადაცია - მაღალი კონცენტრაციის პრაიმერების მცირე მოცულობად გადანაწილება შესანახად. მოერიდეთ მრავალჯერადი გაყინვას და გალღობას ან 4 ° C ხანგრძლივ კრიოპრეზერვაციას.

    Prim პრაიმერების არასწორი დიზაინი (მაგ. პრაიმერის სიგრძე არ არის საკმარისი, დიმერი ჩამოყალიბებულია პრაიმერებს შორის და ა.შ.)

    A-3 მგ2+კონცენტრაცია

    G მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

    A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

    Ne გაცხელების მაღალი ტემპერატურა გავლენას ახდენს პრაიმერისა და შაბლონის შეკავშირებაზე. --— შეამცირეთ გაცხელების ტემპერატურა და გააუმჯობესეთ მდგომარეობა 2 ° C გრადიენტით.

    A-5 გაგრძელების დრო

    Extension გახანგრძლივების მოკლე დრო —— გაზარდეთ გაფართოების დრო.

    კითხვა: ცრუ დადებითი

    ფენომენები: უარყოფითი ნიმუშები ასევე აჩვენებს სამიზნე მიმდევრობის ზოლებს.

    PCR- ის A-1 დაბინძურება

    Target სამიზნე მიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება - სიფრთხილით არ მოხდეს პიპეტით ნეგატიურ ნიმუშში სამიზნე მიმდევრობის შემცველი ნიმუშის გადატანა ან ცენტრიფუგის მილებიდან. რეაგენტები ან აღჭურვილობა უნდა იყოს ავტოკლავირებული არსებული ნუკლეინის მჟავების აღმოსაფხვრელად, ხოლო დაბინძურების არსებობა უნდა განისაზღვროს უარყოფითი კონტროლის ექსპერიმენტებით.

    ■ რეაგენტით დაბინძურება —— დატოვეთ რეაგენტები და შეინახეთ დაბალ ტემპერატურაზე.

    A-2 Primer

    G მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

    Prim პრაიმერის არასათანადო დიზაინი და სამიზნე მიმდევრობას აქვს ჰომოლოგია არა სამიზნე მიმდევრობასთან. —— პრაიმერების ხელახალი დიზაინი.

    კითხვა: არასპეციფიკური გაძლიერება

    ფენომენები: PCR გამაძლიერებელი ზოლები შეუსაბამოა მოსალოდნელ ზომასთან, დიდი ან პატარა, ან ზოგჯერ ხდება სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.

    A-1 პრაიმერი

    Prim პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა

    —— ხელახლა დიზაინის პრაიმერი.

    ■ პრაიმერის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

    A-2 მგ2+ კონცენტრაცია

    M მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - Mg2+ კონცენტრაციის სწორად შემცირება: Mg ოპტიმიზაცია2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

    A-3 თერმოსტაბილი პოლიმერაზა

    En ფერმენტის ჭარბი რაოდენობა - ფერმენტის ოდენობის სათანადოდ შემცირება 0.5 U ინტერვალით.

    A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

    ■ გამოცხობის ტემპერატურა ძალიან დაბალია--სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორეტაპიანი დადნობის მეთოდი

    A-5 PCR ციკლი

    PC ძალიან ბევრი PCR ციკლი —— შეამცირეთ PCR ციკლების რაოდენობა.

    Q: Patchy ან ნაცხის შემსრულებლები

    A-1 პრაიმერი—— ცუდი სპეციფიკა —— პრაიმერის ხელახალი დიზაინი, პრაიმერის პოზიციისა და სიგრძის შეცვლა მისი სპეციფიურობის გასაზრდელად; ან განახორციელოს ჩადგმული PCR.

    A-2 თარგი დნმ

    —— შაბლონი არ არის სუფთა —— გაასუფთავე თარგი ან ამოიღე დნმ გამწმენდი ნაკრებებით.

    A-3 მგ2+ კონცენტრაცია

    —— მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ მგ2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

    A-4 dNTP

    —— dNTP– ების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ dNTP– ის კონცენტრაცია

    A-5 გამოცხობის ტემპერატურა

    —— ძალიან დაბალი დალუქვის ტემპერატურა —— სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა

    A-6 ციკლი

    —— ძალიან ბევრი ციკლი —— ციკლის ნომრის ოპტიმიზაცია

    კითხვა: რამდენი თარგი დნმ უნდა დაემატოს 50 μl PCR რეაქციის სისტემაში?
    ytry
    კითხვა: როგორ გავაძლიეროთ გრძელი ფრაგმენტები?

    პირველი ნაბიჯი არის შესაბამისი პოლიმერაზის არჩევა. რეგულარული Taq პოლიმერაზა არ შეიძლება კორექცია 3'-5 'ეგზონუკლეაზის აქტივობის არარსებობის გამო, ხოლო შეუსაბამობა მნიშვნელოვნად შეამცირებს ფრაგმენტების გაფართოების ეფექტურობას. ამრიგად, რეგულარული Taq პოლიმერაზა ვერ ახერხებს 5 კბ -ზე მეტი სამიზნე ფრაგმენტების ეფექტურად გაძლიერებას. Taq პოლიმერაზა სპეციალური მოდიფიკაციით ან სხვა მაღალი ერთგულების პოლიმერაზით უნდა შეირჩეს გაფართოების ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად და ხანგრძლივი ფრაგმენტის გაძლიერების საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად. გარდა ამისა, გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება ასევე მოითხოვს პრაიმერის დიზაინის შესაბამის კორექტირებას, დენატურაციის დროს, გაფართოების დროს, ბუფერულ pH- ს და სხვა. ჩვეულებრივ, პრაიმერები 18-24 bp– ით შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი მოსავლიანობა. შაბლონის დაზიანების თავიდან ასაცილებლად, 94 ° C ტემპერატურაზე დენატურაციის დრო უნდა შემცირდეს 30 წამამდე ან ნაკლები ციკლის განმავლობაში, ხოლო ტემპერატურის გაზრდის დრო 94 ° C- მდე გაძლიერებამდე 1 წუთზე ნაკლები. უფრო მეტიც, გაფართოების ტემპერატურის დადგენა დაახლოებით 68 ° C- ზე და გაფართოების დროის დაპროექტება 1 კბ/წთ სიჩქარის მიხედვით შეუძლია უზრუნველყოს გრძელი ფრაგმენტების ეფექტური გაძლიერება.

    კითხვა: როგორ გავაუმჯობესოთ PCR- ის გამაძლიერებელი ერთგულება?

    PCR- ის გაძლიერების შეცდომის მაჩვენებელი შეიძლება შემცირდეს დნმ -ის სხვადასხვა პოლიმერაზას მაღალი ერთგულების გამოყენებით. ყველა Taq დნმ პოლიმერაზას შორის, რაც აქამდე იქნა ნაპოვნი, Pfu ფერმენტს აქვს ყველაზე დაბალი შეცდომის მაჩვენებელი და ყველაზე მაღალი ერთგულება (იხ. თანდართული ცხრილი). ფერმენტების შერჩევის გარდა, მკვლევარებს შეუძლიათ კიდევ უფრო შეამცირონ PCR მუტაციის მაჩვენებელი რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციით, მათ შორის ბუფერული შემადგენლობის ოპტიმიზაციით, თერმოსტაბილური პოლიმერაზის კონცენტრაციით და PCR ციკლის ნომრის ოპტიმიზაციით.

    ჩაწერეთ თქვენი შეტყობინება აქ და გამოგვიგზავნეთ