სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები
მახასიათებლები
■ მარტივი და სწრაფი: PCR გაძლიერება შეიძლება განხორციელდეს უშუალოდ სისხლის შაბლონით, ნიმუშის მომზადებისა და დნმ -ის მოპოვების დამღლელი ნაბიჯების გარეშე.
■ მაღალი სიწმინდე: ნიმუშის წინასწარი დამუშავებისა და დნმ-ის მოპოვების საფეხურების გამოტოვება ხელს შეუწყობს ნიმუშების ჯვარედინი დაბინძურების თავიდან აცილებას.
■ მაღალი გამტარუნარიანობა: ფართომასშტაბიანი ნიმუშების PCR იდენტიფიკაცია შეიძლება შესრულდეს 96/384 ჭაბურღილის PCR ფირფიტებთან ერთად.
Univers ძლიერი უნივერსალურობა: ამ ნაკრს შეუძლია ეფექტურად გააძლიეროს მაღალი GC ფრაგმენტები ან ფრაგმენტები რთული მეორადი სტრუქტურით, ხოლო გამაძლიერებელი სიგრძე შეიძლება იყოს 5 კბ -მდე.
Stress ძლიერი სტრესის წინააღმდეგობა: ეს ნაკრები შეიძლება გამოყენებულ იქნას სხვადასხვა სახეობის და სხვადასხვა სახის სისხლის ნიმუშებზე.
პროგრამები
ამ ნაკრების PCR პროდუქტები შეიცავს "A" 3′- ბოლოში, რომელიც შეიძლება პირდაპირ იქნას გამოყენებული TA ვექტორული კლონირებისათვის. ეს ნაკრები შეიძლება გამოყენებულ იქნას გენომური დნმ-ის ფრაგმენტების გასაძლიერებლად, მაღალი გამტარუნარიანობის გენეტიკური ანალიზისა და გენოტიპიური ანალიზისთვის (როგორიცაა გენების გამოვლენა).
ყველა პროდუქტი შეიძლება მორგებული იყოს ODM/OEM– ისთვის. Დეტალებისთვის,გთხოვთ დააწკაპუნოთ მორგებულ სერვისზე (ODM/OEM)
 |
ადამიანის EDTA ანტიკოაგულაციის სახით, როგორც შაბლონი, 4 გენი განსხვავებული GC შემცველობით გაძლიერდა სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრებით. PCR რეაქციის სისტემა იყო 20 μl, ხოლო 1 μl სისხლი იყო გამოყენებული როგორც შაბლონი. M: TIANGEN მარკერი II; 1: ფრაგმენტის ზომა 1090 bp, GC შემცველობა 68.1%; 2: ფრაგმენტის ზომა 1915 bp, GC შემცველობა 70.4%; 3: ფრაგმენტის ზომა 448 bp, GC შემცველობა 74.8%; 4: ფრაგმენტის ზომა 1527 bp, GC შემცველობა 61.5%. ექსპერიმენტული შედეგები: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები შეიძლება ეფექტურად გააძლიეროს დნმ-ის ფრაგმენტები GC შემცველობით 61.5%-74.8%დიაპაზონში, რაც იმაზე მეტყველებს, რომ მას შეუძლია გააძლიეროს მაღალი GC ფრაგმენტები. |
 |
ადამიანის EDTA ანტიკოაგულაციის სახით, როგორც შაბლონი, სხვადასხვა სიგრძის 5 გენი (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 და Hn4.0) გაძლიერდა სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრებით. PCR რეაქციის სისტემა იყო 20 μl, ხოლო 1 μl სისხლი იყო გამოყენებული როგორც შაბლონი. M: TIANGEN მარკერი II; 1-3: 3 სხვადასხვა სისხლის ნიმუში; NTC: კონტროლი პრაიმერის გარეშე. ექსპერიმენტული შედეგები: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები შეიძლება გაზარდოს ფრაგმენტები სიგრძით 4 კბ -მდე, რაც მიანიშნებს, რომ მას შეუძლია გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება. |
 |
ადამიანის EDTA ანტიკოაგულაციის სახით, როგორც შაბლონი, სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები გამოიყენებოდა სისხლის სხვადასხვა ნიმუშების PCR გამოვლენისთვის. PCR რეაქციის სისტემა იყო 20 μl, ხოლო 1 μl სისხლი იყო გამოყენებული როგორც შაბლონი. M: TIANGEN მარკერი II; 1-9: სისხლის დატვირთვის რაოდენობაა 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl და 5 μl, შესაბამისად; NTC: კონტროლი შაბლონის გარეშე ექსპერიმენტული შედეგები: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები აქვს ძლიერ წინააღმდეგობას სისხლის მიმართ და შეუძლია გააძლიეროს სისხლის ნიმუშები დატვირთვის დიაპაზონით 0.1-5 მკლ. |
 |
ადამიანის, ვირთხის, ქათმის და სხვა სახეობების სისხლის ნიმუშები სხვადასხვა სამკურნალო საშუალებებით იქნა გამოყენებული როგორც შაბლონები. სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები გამოიყენებოდა PRNP (ადამიანის, 750 bp), Actin (ვირთხა, 200 bp) და β-Actin (Chicken, 1.0 kb) გასაძლიერებლად. PCR რეაქციის სისტემა იყო 20 μl, ხოლო 1 μl სისხლი იყო გამოყენებული როგორც შაბლონი. M: TIANGEN მარკერი II. ექსპერიმენტული შედეგები: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები შეიძლება გამოყენებულ იქნას ნიმუშების ფართო სპექტრზე, ხოლო პირდაპირი PCR გამოვლენა შეიძლება განხორციელდეს სხვადასხვა სახის სისხლის ნიმუშებზე, სხვადასხვა მკურნალობით. |
A-1 შაბლონი
■ შაბლონი შეიცავს ცილის მინარევებს ან Taq ინჰიბიტორებს და სხვ. —— გაასუფთავეთ დნმ შაბლონი, ამოიღეთ ცილის მინარევები ან ამოიღეთ დნმ შაბლონი გამწმენდი ნაკრებებით.
Temp შაბლონის დენატურაცია არ არის სრულყოფილი —— სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.
■ შაბლონის დეგრადაცია —— შაბლონის ხელახლა მომზადება.
A-2 პრაიმერი
Prim პრაიმერების დაბალი ხარისხი-პრაიმერის ხელახალი სინთეზი.
■ პრაიმერის დეგრადაცია - მაღალი კონცენტრაციის პრაიმერების მცირე მოცულობად გადანაწილება შესანახად. მოერიდეთ მრავალჯერადი გაყინვას და გალღობას ან 4 ° C ხანგრძლივ კრიოპრეზერვაციას.
Prim პრაიმერების არასწორი დიზაინი (მაგ. პრაიმერის სიგრძე არ არის საკმარისი, დიმერი ჩამოყალიბებულია პრაიმერებს შორის და ა.შ.)
A-3 მგ2+კონცენტრაცია
G მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.
A-4 გამოცხობის ტემპერატურა
Ne გაცხელების მაღალი ტემპერატურა გავლენას ახდენს პრაიმერისა და შაბლონის შეკავშირებაზე. --— შეამცირეთ გაცხელების ტემპერატურა და გააუმჯობესეთ მდგომარეობა 2 ° C გრადიენტით.
A-5 გაგრძელების დრო
Extension გახანგრძლივების მოკლე დრო —— გაზარდეთ გაფართოების დრო.
ფენომენები: უარყოფითი ნიმუშები ასევე აჩვენებს სამიზნე მიმდევრობის ზოლებს.
PCR- ის A-1 დაბინძურება
Target სამიზნე მიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება - სიფრთხილით არ მოხდეს პიპეტით ნეგატიურ ნიმუშში სამიზნე მიმდევრობის შემცველი ნიმუშის გადატანა ან ცენტრიფუგის მილებიდან. რეაგენტები ან აღჭურვილობა უნდა იყოს ავტოკლავირებული არსებული ნუკლეინის მჟავების აღმოსაფხვრელად, ხოლო დაბინძურების არსებობა უნდა განისაზღვროს უარყოფითი კონტროლის ექსპერიმენტებით.
■ რეაგენტით დაბინძურება —— დატოვეთ რეაგენტები და შეინახეთ დაბალ ტემპერატურაზე.
A-2 Primer
G მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.
Prim პრაიმერის არასათანადო დიზაინი და სამიზნე მიმდევრობას აქვს ჰომოლოგია არა სამიზნე მიმდევრობასთან. —— პრაიმერების ხელახალი დიზაინი.
ფენომენები: PCR გამაძლიერებელი ზოლები შეუსაბამოა მოსალოდნელ ზომასთან, დიდი ან პატარა, ან ზოგჯერ ხდება სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.
A-1 პრაიმერი
Prim პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა
—— ხელახლა დიზაინის პრაიმერი.
■ პრაიმერის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.
A-2 მგ2+ კონცენტრაცია
M მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - Mg2+ კონცენტრაციის სწორად შემცირება: Mg ოპტიმიზაცია2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.
A-3 თერმოსტაბილი პოლიმერაზა
En ფერმენტის ჭარბი რაოდენობა - ფერმენტის ოდენობის სათანადოდ შემცირება 0.5 U ინტერვალით.
A-4 გამოცხობის ტემპერატურა
■ გამოცხობის ტემპერატურა ძალიან დაბალია--სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორეტაპიანი დადნობის მეთოდი
A-5 PCR ციკლი
PC ძალიან ბევრი PCR ციკლი —— შეამცირეთ PCR ციკლების რაოდენობა.
A-1 პრაიმერი—— ცუდი სპეციფიკა —— პრაიმერის ხელახალი დიზაინი, პრაიმერის პოზიციისა და სიგრძის შეცვლა მისი სპეციფიურობის გასაზრდელად; ან განახორციელოს ჩადგმული PCR.
A-2 თარგი დნმ
—— შაბლონი არ არის სუფთა —— გაასუფთავე თარგი ან ამოიღე დნმ გამწმენდი ნაკრებებით.
A-3 მგ2+ კონცენტრაცია
—— მგ2+ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ მგ2+ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg2+ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად2+ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.
A-4 dNTP
—— dNTP– ების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ dNTP– ის კონცენტრაცია
A-5 გამოცხობის ტემპერატურა
—— ძალიან დაბალი დალუქვის ტემპერატურა —— სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა
A-6 ციკლი
—— ძალიან ბევრი ციკლი —— ციკლის ნომრის ოპტიმიზაცია
პირველი ნაბიჯი არის შესაბამისი პოლიმერაზის არჩევა. რეგულარული Taq პოლიმერაზა არ შეიძლება კორექცია 3'-5 'ეგზონუკლეაზის აქტივობის არარსებობის გამო, ხოლო შეუსაბამობა მნიშვნელოვნად შეამცირებს ფრაგმენტების გაფართოების ეფექტურობას. ამრიგად, რეგულარული Taq პოლიმერაზა ვერ ახერხებს 5 კბ -ზე მეტი სამიზნე ფრაგმენტების ეფექტურად გაძლიერებას. Taq პოლიმერაზა სპეციალური მოდიფიკაციით ან სხვა მაღალი ერთგულების პოლიმერაზით უნდა შეირჩეს გაფართოების ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად და ხანგრძლივი ფრაგმენტის გაძლიერების საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად. გარდა ამისა, გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება ასევე მოითხოვს პრაიმერის დიზაინის შესაბამის კორექტირებას, დენატურაციის დროს, გაფართოების დროს, ბუფერულ pH- ს და სხვა. ჩვეულებრივ, პრაიმერები 18-24 bp– ით შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი მოსავლიანობა. შაბლონის დაზიანების თავიდან ასაცილებლად, 94 ° C ტემპერატურაზე დენატურაციის დრო უნდა შემცირდეს 30 წამამდე ან ნაკლები ციკლის განმავლობაში, ხოლო ტემპერატურის გაზრდის დრო 94 ° C- მდე გაძლიერებამდე 1 წუთზე ნაკლები. უფრო მეტიც, გაფართოების ტემპერატურის დადგენა დაახლოებით 68 ° C- ზე და გაფართოების დროის დაპროექტება 1 კბ/წთ სიჩქარის მიხედვით შეუძლია უზრუნველყოს გრძელი ფრაგმენტების ეფექტური გაძლიერება.
PCR- ის გაძლიერების შეცდომის მაჩვენებელი შეიძლება შემცირდეს დნმ -ის სხვადასხვა პოლიმერაზას მაღალი ერთგულების გამოყენებით. ყველა Taq დნმ პოლიმერაზას შორის, რაც აქამდე იქნა ნაპოვნი, Pfu ფერმენტს აქვს ყველაზე დაბალი შეცდომის მაჩვენებელი და ყველაზე მაღალი ერთგულება (იხ. თანდართული ცხრილი). ფერმენტების შერჩევის გარდა, მკვლევარებს შეუძლიათ კიდევ უფრო შეამცირონ PCR მუტაციის მაჩვენებელი რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციით, მათ შორის ბუფერული შემადგენლობის ოპტიმიზაციით, თერმოსტაბილური პოლიმერაზის კონცენტრაციით და PCR ციკლის ნომრის ოპტიმიზაციით.
პროდუქტების კატეგორიები
რატომ ავირჩიეთ აშშ
დაარსების დღიდან ჩვენი ქარხანა ავითარებს პირველი მსოფლიო კლასის პროდუქტს პრინციპების დაცვით
ხარისხის პირველ რიგში. ჩვენმა პროდუქტებმა მოიპოვეს შესანიშნავი რეპუტაცია ინდუსტრიაში და ძვირფასი ნდობა ახალ და ძველ მომხმარებლებს შორის.
- ტელ: +86 010-59822688
- შენობა 5, No86, Shuangying West Road, Changping District, პეკინი.
- people@tiangen.com
