მაგნიტური ცხოველების ქსოვილის გენომიკური დნმ ნაკრები

A-1 საწყის ნიმუშში უჯრედების ან ვირუსის დაბალი კონცენტრაცია-გაამდიდრეთ უჯრედების ან ვირუსების კონცენტრაცია.

A-2 ნიმუშების არასაკმარისი ლიზინგი-ნიმუშები საფუძვლიანად არ არის შერეული ლიზის ბუფერთან. რეკომენდებულია საფუძვლიანად შეურიოთ პულსი-მორევა 1-2-ჯერ. - არასაკმარისი უჯრედული ლიზისი გამოწვეული პროტეინაზა K. აქტივობის შემცირებით. ვარაუდობენ, რომ ქსოვილი დავჭრათ პატარა ნაჭრებად და გავახანგრძლივოთ აბაზანის დრო ლიზიატში არსებული ყველა ნარჩენის მოსაშორებლად.

A-3 არასაკმარისი დნმ-ის ადსორბცია. -ლიზატის დატრიალების სვეტში გადატანამდე არ იყო დამატებული ეთანოლი ან დაბალი პროცენტი 100% ეთანოლის ნაცვლად.

A-4 გამხსნელი ბუფერის pH მნიშვნელობა ძალიან დაბალია. -დაარეგულირეთ pH 8.0-8.3-მდე.

ნარჩენი ეთანოლი გამხსნელში.

- გამწმენდში არის ნარჩენი სარეცხი ბუფერი PW. ეთანოლის ამოღება შესაძლებელია ბრუნვის სვეტის ცენტრიფუგირებით 3-5 წუთის განმავლობაში და შემდეგ ოთახის ტემპერატურაზე ან 50 ℃ ინკუბატორში მოთავსებით 1-2 წუთის განმავლობაში.

A-1 ნიმუში არ არის ახალი. - ამოიღეთ დნმ -ის დადებითი ნიმუში, როგორც კონტროლი, რათა დადგინდეს, არის თუ არა დეგრადირებული ნიმუშში არსებული დნმ.

A-2 არასწორი წინასწარი მკურნალობა. - გამოწვეულია ზედმეტი თხევადი აზოტის დაფქვით, ტენიანობის აღდგენით ან ნიმუშის ძალიან დიდი რაოდენობით.

წინასწარი მკურნალობა უნდა განსხვავდებოდეს სხვადასხვა ნიმუშისთვის. მცენარეული ნიმუშებისთვის, დარწმუნდით, რომ საფუძვლიანად გახეხეთ თხევადი აზოტით. ცხოველთა ნიმუშებისათვის ჰომოგენირება ან საფუძვლიანად დაფქვა თხევად აზოტში. უჯრედის კედლების მქონე ნიმუშებისთვის, როგორიცაა G+ ბაქტერია და საფუარი, ვარაუდობენ, რომ გამოიყენონ ლიზოზიმი, ლიტიკაზა ან მექანიკური მეთოდები უჯრედის კედლების გასანადგურებლად.

4992201/4992202 მცენარეთა გენომიკური დნმ ნაკრები იღებს სვეტზე დაფუძნებულ მეთოდს, რომელიც მოითხოვს ქლოროფორმს მოპოვებისთვის. ეს განსაკუთრებით შესაფერისია სხვადასხვა მცენარეული ნიმუშებისთვის, ასევე მცენარეული მშრალი ფხვნილისთვის. Hi-DNAsecure Plant Kit ასევე არის სვეტზე დაფუძნებული, მაგრამ არ საჭიროებს ფენოლ/ქლოროფორმის მოპოვებას, რაც მას უსაფრთხო და არატოქსიკურს ხდის. ეს შესაფერისია მაღალი პოლისაქარიდების და პოლიფენოლის შემცველობის მქონე მცენარეებისთვის. 4992709/4992710 DNAquick Plant System იღებს თხევად დაფუძნებულ მეთოდს. ფენოლის/ქლოროფორმის მოპოვება ასევე არ არის საჭირო. გაწმენდის პროცედურა არის მარტივი და სწრაფი, შეზღუდული არ არის ნიმუშის საწყისი ოდენობა, ამიტომ მომხმარებლებს შეუძლიათ მოქნილად შეცვალონ რაოდენობა ექსპერიმენტული მოთხოვნების შესაბამისად. GDNA ფრაგმენტების დიდი ზომის მიღება შესაძლებელია მაღალი მოსავლიანობით.

გენომური დნმ ამოღებულია ადამიანის მთლიანი სისხლის სხვადასხვა მოცულობისგან TIANamp Blood DNA DNA Kit. შედეგები ასეთია. შედეგები ჩამოთვლილია მხოლოდ მითითების სახით, მოპოვების ფაქტობრივი შედეგები დამოკიდებულია ნიმუშების პირობებზე.

სისხლის შედედების დნმ -ის მოპოვება შეიძლება განხორციელდეს ამ ორ ნაკრებში მოცემული რეაქტივების გამოყენებით, პროტოკოლის შეცვლით სისხლის შედედების დნმ -ის მოპოვების სპეციფიკურ ინსტრუქციად. სისხლის შედედების დნმ -ის მოპოვების ოქმის რბილი ასლი შეიძლება გაიცეს მოთხოვნისთანავე.

შეაჩერე ახალი ნიმუში 1 მლ PBS, ნორმალური ხსნარი ან TE ბუფერი. სრულად ჰომოგენიზაცია მოახდინეთ ნიმუშის ჰომოგენიზატორით და შეაგროვეთ ნალექი მილის ძირში ცენტრიფუგირების გზით. გადაყარეთ ზეწოლა და გააჩერეთ ნალექი 200 μl ბუფერული GA- ით. ინსტრუქციის მიხედვით შესაძლებელია შემდეგი დნმ -ის გაწმენდა.

პლაზმაში, შრატში და სხეულის სითხის ნიმუშებში gDNA- ს გასაწმენდად რეკომენდებულია TIANamp მიკრო დნმ ნაკრები. შრატის/პლაზმის ნიმუშებიდან ვირუსის gDNA გაწმენდისათვის რეკომენდებულია TIANamp Virus DNA/RNA ნაკრები. შრატისა და პლაზმის ნიმუშებიდან ბაქტერიული gDNA გაწმენდისათვის რეკომენდებულია TIANamp Bacteria DNA Kit (ლიზოზიმი უნდა შედიოდეს დადებით ბაქტერიაზე). ნერწყვის ნიმუშებისთვის რეკომენდებულია Hi-Swab DNA Kit და TIANamp Bacteria DNA Kit.

DNAsecure Plant Kit ან DNAquick Plant System რეკომენდირებულია სოკოვანი გენომის მოპოვებისთვის. საფუარის გენომის მოპოვებისთვის რეკომენდებულია TIANamp საფუარის დნმ-ის ნაკრები (ლიტიკაზა უნდა იყოს თვითმომზადებული).