მაუსის ქსოვილის პირდაპირი PCR ნაკრები

სამიზნე გენის სწრაფი გაძლიერება უშუალოდ ცხოველური ქსოვილის ნიმუშებიდან მოპოვების გარეშე.

Mouse Tissue Direct PCR ნაკრები იღებს შეფუთვის უნიკალურ დიზაინს, რომელიც მოიცავს ყველა რეაგენტს დნმ -ის სწრაფი გენომური მომზადებისა და PCR ამპლიფიკაციისათვის. ის გამოიყენება ერთსაფეხურიანი გენომის დნმ-ის გაწმენდისთვის თაგვის ქსოვილებიდან (კუდი, ყური და ფეხის თითი) და შემდგომი PCR გაძლიერება და გამოვლენა. მთელი პროცესი არ მოიცავს ჰომოგენიზაციას, დამსხვრევას, ღამით მონელებას, ორგანული გამხსნელის მოპოვებას, ეთანოლის დალექვას ან სვეტის გამწმენდის საფეხურებს. სტაბილური შედეგების მიღწევა შესაძლებელია მარტივი და სწრაფი ოპერაციებით.

ამ ნაკრების მიერ მოწოდებული 2 დირიანი PCR MasterMix არის უაღრესად თავსებადი PCR რეაგენტი, რომელსაც შეუძლია ეფექტურად და კონკრეტულად გააძლიეროს დნმ, მინარევების მოცილების გარეშე, როგორიცაა ცილები. ეს რეაგენტი შეიცავს ანტისხეულების მოდიფიცირებულ ცხელ დაწყებასთაკ დნმ პოლიმერაზა, dNTPs, MgCl₂, ბუფერები, ასევე გამაძლიერებელი, ოპტიმიზატორი და სტაბილიზატორი PCR რეაქციისათვის. PCR რეაქცია შეიძლება განხორციელდეს უხეშად მოპოვებული შაბლონის და კონკრეტული პრაიმერის დამატებით. მთელი პროცესი არის სწრაფი, მარტივი, მგრძნობიარე, სპეციფიკური და სტაბილური, რაც განსაკუთრებით შესაფერისია მაღალი გამტარუნარიანობის სკრინინგისთვის. 2 დირიანი PCR MasterMix შეიცავს წინასწარ შერეულ ელექტროფორეზის საღებავს, რათა რეაქციის შემდეგ PCR პროდუქტები პირდაპირ გაიგზავნოს ელექტროფორეზის გამოვლენისათვის. PCR პროდუქტის 3 'ბოლოს აქვს A- კუდი, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას TA კლონირებისთვის.

Კატა. არა	შეფუთვის ზომა
4992531	20 μl × 50 rxn
4992532	20 μl × 200 rxn

გამოგვიგზავნეთ ელ.წერილი ჩვენთვის

პროდუქტის დეტალი

სამუშაო ნაკადი

ექსპერიმენტული მაგალითი

ხშირად დასმული კითხვები

პროდუქტის წარწერები

მახასიათებლები

■ მარტივი და სწრაფი: გენომიკური დნმ შეიძლება სწრაფად ამოიღონ თაგვის ქსოვილებიდან 60 წუთში თხევადი აზოტის დაფქვისა და ორგანული გამხსნელით მოპოვების გარეშე.
Application ფართო გამოყენება: ის შესაფერისია გენომური დნმ-ის ერთსაფეხურიანი მოპოვებისთვის თაგვის კუდიდან, ყურიდან, თითებიდან და სხვა ქსოვილებიდან.
■ მაღალი სპეციფიკა: ამ პროდუქტში გამოყენებული Taq პოლიმერაზა არის ანტისხეულების მოდიფიცირებული ცხელი დაწყების ფერმენტი, მაღალი შაბლონური და პრაიმერისადმი მიდრეკილებით და ამპლიფიკაციის სპეციფიკით, რაც განსაკუთრებით შესაფერისია გენოტიპიზაციისა და ტრანსგენური იდენტიფიკაციისათვის.
■ გენის გამოვლენა: პროდუქტი ადვილია საიმედო შედეგებით და განსაკუთრებით შესაფერისია თაგვის ქსოვილების მაღალი გამტარუნარიანობის ანალიზისა და გამოვლენისათვის

ყველა პროდუქტი შეიძლება მორგებული იყოს ODM/OEM– ისთვის. Დეტალებისთვის,გთხოვთ დააწკაპუნოთ მორგებულ სერვისზე (ODM/OEM)

წინა: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები

შემდეგი: სწრაფი საიტის რეჟისორი მუტაგენეზის ნაკრები

Experimental Example

თაგვის ქსოვილის პირდაპირი PCR ნაკრებისა და მიმწოდებელი A– ს შესაბამისი პროდუქტის გამოყენებით, გაძლიერდეს 1000 bp, 2000 bp და 3000 bp ფრაგმენტები თაგვის კუდიდან, თაგვის ყურიდან და ვირთხის კუდიდან შესაბამისად. შედეგმა აჩვენა, რომ Mouse Tissue Direct PCR ნაკრები აქვს უკეთესი სპეციფიკა და წარმატების მაჩვენებელი.

Q: არ არის გამაძლიერებელი ზოლები

A-1 შაბლონი

■ შაბლონი შეიცავს ცილის მინარევებს ან Taq ინჰიბიტორებს და სხვ. —— გაასუფთავეთ დნმ შაბლონი, ამოიღეთ ცილის მინარევები ან ამოიღეთ დნმ შაბლონი გამწმენდი ნაკრებებით.

Temp შაბლონის დენატურაცია არ არის სრულყოფილი —— სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

■ შაბლონის დეგრადაცია —— შაბლონის ხელახლა მომზადება.

A-2 პრაიმერი

Prim პრაიმერების დაბალი ხარისხი-პრაიმერის ხელახალი სინთეზი.

■ პრაიმერის დეგრადაცია - მაღალი კონცენტრაციის პრაიმერების მცირე მოცულობად გადანაწილება შესანახად. მოერიდეთ მრავალჯერადი გაყინვას და გალღობას ან 4 ° C ხანგრძლივ კრიოპრეზერვაციას.

Prim პრაიმერების არასწორი დიზაინი (მაგ. პრაიმერის სიგრძე არ არის საკმარისი, დიმერი ჩამოყალიბებულია პრაიმერებს შორის და ა.შ.)

A-3 მგ²⁺კონცენტრაცია

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

Ne გაცხელების მაღალი ტემპერატურა გავლენას ახდენს პრაიმერისა და შაბლონის შეკავშირებაზე. --— შეამცირეთ გაცხელების ტემპერატურა და გააუმჯობესეთ მდგომარეობა 2 ° C გრადიენტით.

A-5 გაგრძელების დრო

Extension გახანგრძლივების მოკლე დრო —— გაზარდეთ გაფართოების დრო.

კითხვა: ცრუ დადებითი

ფენომენები: უარყოფითი ნიმუშები ასევე აჩვენებს სამიზნე მიმდევრობის ზოლებს.

PCR- ის A-1 დაბინძურება

Target სამიზნე მიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება - სიფრთხილით არ მოხდეს პიპეტით ნეგატიურ ნიმუშში სამიზნე მიმდევრობის შემცველი ნიმუშის გადატანა ან ცენტრიფუგის მილებიდან. რეაგენტები ან აღჭურვილობა უნდა იყოს ავტოკლავირებული არსებული ნუკლეინის მჟავების აღმოსაფხვრელად, ხოლო დაბინძურების არსებობა უნდა განისაზღვროს უარყოფითი კონტროლის ექსპერიმენტებით.

■ რეაგენტით დაბინძურება —— დატოვეთ რეაგენტები და შეინახეთ დაბალ ტემპერატურაზე.

A-2 Primer

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

Prim პრაიმერის არასათანადო დიზაინი და სამიზნე მიმდევრობას აქვს ჰომოლოგია არა სამიზნე მიმდევრობასთან. —— პრაიმერების ხელახალი დიზაინი.

კითხვა: არასპეციფიკური გაძლიერება

ფენომენები: PCR გამაძლიერებელი ზოლები შეუსაბამოა მოსალოდნელ ზომასთან, დიდი ან პატარა, ან ზოგჯერ ხდება სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.

A-1 პრაიმერი

Prim პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა

—— ხელახლა დიზაინის პრაიმერი.

■ პრაიმერის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

A-2 მგ²⁺ კონცენტრაცია

M მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - Mg2+ კონცენტრაციის სწორად შემცირება: Mg ოპტიმიზაცია²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-3 თერმოსტაბილი პოლიმერაზა

En ფერმენტის ჭარბი რაოდენობა - ფერმენტის ოდენობის სათანადოდ შემცირება 0.5 U ინტერვალით.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

■ გამოცხობის ტემპერატურა ძალიან დაბალია--სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორეტაპიანი დადნობის მეთოდი

A-5 PCR ციკლი

PC ძალიან ბევრი PCR ციკლი —— შეამცირეთ PCR ციკლების რაოდენობა.

Q: Patchy ან ნაცხის შემსრულებლები

A-1 პრაიმერი—— ცუდი სპეციფიკა —— პრაიმერის ხელახალი დიზაინი, პრაიმერის პოზიციისა და სიგრძის შეცვლა მისი სპეციფიურობის გასაზრდელად; ან განახორციელოს ჩადგმული PCR.

A-2 თარგი დნმ

—— შაბლონი არ არის სუფთა —— გაასუფთავე თარგი ან ამოიღე დნმ გამწმენდი ნაკრებებით.

A-3 მგ²⁺ კონცენტრაცია

—— მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ მგ²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 dNTP

—— dNTP– ების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ dNTP– ის კონცენტრაცია

A-5 გამოცხობის ტემპერატურა

—— ძალიან დაბალი დალუქვის ტემპერატურა —— სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა

A-6 ციკლი

—— ძალიან ბევრი ციკლი —— ციკლის ნომრის ოპტიმიზაცია

კითხვა: რამდენი თარგი დნმ უნდა დაემატოს 50 μl PCR რეაქციის სისტემაში?

კითხვა: როგორ გავაძლიეროთ გრძელი ფრაგმენტები?

პირველი ნაბიჯი არის შესაბამისი პოლიმერაზის არჩევა. რეგულარული Taq პოლიმერაზა არ შეიძლება კორექცია 3'-5 'ეგზონუკლეაზის აქტივობის არარსებობის გამო, ხოლო შეუსაბამობა მნიშვნელოვნად შეამცირებს ფრაგმენტების გაფართოების ეფექტურობას. ამრიგად, რეგულარული Taq პოლიმერაზა ვერ ახერხებს 5 კბ -ზე მეტი სამიზნე ფრაგმენტების ეფექტურად გაძლიერებას. Taq პოლიმერაზა სპეციალური მოდიფიკაციით ან სხვა მაღალი ერთგულების პოლიმერაზით უნდა შეირჩეს გაფართოების ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად და ხანგრძლივი ფრაგმენტის გაძლიერების საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად. გარდა ამისა, გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება ასევე მოითხოვს პრაიმერის დიზაინის შესაბამის კორექტირებას, დენატურაციის დროს, გაფართოების დროს, ბუფერულ pH- ს და სხვა. ჩვეულებრივ, პრაიმერები 18-24 bp– ით შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი მოსავლიანობა. შაბლონის დაზიანების თავიდან ასაცილებლად, 94 ° C ტემპერატურაზე დენატურაციის დრო უნდა შემცირდეს 30 წამამდე ან ნაკლები ციკლის განმავლობაში, ხოლო ტემპერატურის გაზრდის დრო 94 ° C- მდე გაძლიერებამდე 1 წუთზე ნაკლები. უფრო მეტიც, გაფართოების ტემპერატურის დადგენა დაახლოებით 68 ° C- ზე და გაფართოების დროის დაპროექტება 1 კბ/წთ სიჩქარის მიხედვით შეუძლია უზრუნველყოს გრძელი ფრაგმენტების ეფექტური გაძლიერება.

კითხვა: როგორ გავაუმჯობესოთ PCR- ის გამაძლიერებელი ერთგულება?

PCR- ის გაძლიერების შეცდომის მაჩვენებელი შეიძლება შემცირდეს დნმ -ის სხვადასხვა პოლიმერაზას მაღალი ერთგულების გამოყენებით. ყველა Taq დნმ პოლიმერაზას შორის, რაც აქამდე იქნა ნაპოვნი, Pfu ფერმენტს აქვს ყველაზე დაბალი შეცდომის მაჩვენებელი და ყველაზე მაღალი ერთგულება (იხ. თანდართული ცხრილი). ფერმენტების შერჩევის გარდა, მკვლევარებს შეუძლიათ კიდევ უფრო შეამცირონ PCR მუტაციის მაჩვენებელი რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციით, მათ შორის ბუფერული შემადგენლობის ოპტიმიზაციით, თერმოსტაბილური პოლიმერაზის კონცენტრაციით და PCR ციკლის ნომრის ოპტიმიზაციით.

ჩაწერეთ თქვენი შეტყობინება აქ და გამოგვიგზავნეთ

პროდუქტების კატეგორიები

რატომ ავირჩიეთ აშშ

დაარსების დღიდან ჩვენი ქარხანა ავითარებს პირველი მსოფლიო კლასის პროდუქტს პრინციპების დაცვით
ხარისხის პირველ რიგში. ჩვენმა პროდუქტებმა მოიპოვეს შესანიშნავი რეპუტაცია ინდუსტრიაში და ძვირფასი ნდობა ახალ და ძველ მომხმარებლებს შორის.

გამოკითხვა