TIANcombi DNA Lyse & Det PCR ნაკრები

დნმ -ის სწრაფი გაწმენდა სხვადასხვა მასალისგან PCR გამოვლენისთვის.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR ნაკრები იღებს შეფუთვის უნიკალურ დიზაინს, რომელიც მოიცავს ყველა რეაგენტს დნმ -ის სწრაფი გენომური მომზადებისა და PCR გაძლიერებისათვის. ის გამოიყენება ერთჯერადი გენომის დნმ-ის გამწმენდი სხვადასხვა ნიმუშებიდან (მცენარეული ქსოვილები, თესლი, ცხოველური ქსოვილები, სისხლი, საფუარი და ბაქტერიები) და შემდგომი PCR გაძლიერება და გამოვლენა. ცილის, რნმ -ის და სხვა მეტაბოლიტების მოცილება, ორგანული გამხსნელის მოპოვება, ასევე ეთანოლის ნალექიანი ნაბიჯები არ არის საჭირო გამწმენდის მთელ პროცესში, რაც ამარტივებს ოპერაციას მარტივად და სწრაფად. პროდუქტის ხარისხი სტაბილური და საიმედოა.

ამ ნაკრების მიერ მოწოდებული 2 × Det PCR MasterMix არის უაღრესად თავსებადი PCR რეაგენტი, რომელსაც შეუძლია ეფექტურად და კონკრეტულად გააძლიეროს დნმ, მინარევების მოხსნის გარეშე, როგორიცაა ცილები. ეს რეაგენტი შეიცავს Taq დნმ პოლიმერაზას, dNTPs, MgCl₂, ბუფერული, ასევე გამაძლიერებელი, ოპტიმიზატორი და სტაბილიზატორი PCR რეაქციისათვის. რეაგენტის გამოყენება ხდის PCR რეაქციას სწრაფ, მარტივ, მგრძნობიარე, სპეციფიკურ და სტაბილურს. ამიტომ, ეს ნაკრები განსაკუთრებით შესაფერისია მაღალი გამტარუნარიანობის სკრინინგისთვის.

Კატა. არა	შეფუთვის ზომა
4992527	20 μl × 50 rxn
4992528	20 μl × 200 rxn

გამოგვიგზავნეთ ელ.წერილი ჩვენთვის

პროდუქტის დეტალი

ექსპერიმენტული მაგალითი

ხშირად დასმული კითხვები

პროდუქტის წარწერები

მახასიათებლები

■ მარტივი და სწრაფი: სხვადასხვა ქსოვილის დნმ შეიძლება ამოღებულ იქნას 5 წუთში თხევადი აზოტის დაფქვის გარეშე.
Applications ფართო გამოყენება: გამოიყენება მცენარეების ფოთლების, თესლის, ცხოველების ქსოვილების, სისხლის ნიმუშებისათვის (ახალი სისხლი, ანტიკოაგულაცია, სისხლის შედედება, სისხლის გამომშრალი ლაქები და სხვა), საფუარი და ბაქტერია.
Compat ძლიერი თავსებადობა: PCR რეაქტივი შესაფერისია სხვადასხვა ნიმუშის წყაროებიდან ამოღებული დნმ -ის გასაძლიერებლად.

პროგრამები

■ გენის გამოვლენა: იდეალური არჩევანია ფართომასშტაბიანი გენის გამოვლენისთვის.

მნიშვნელოვანი შენიშვნები

Samples ფენოლის მაღალი დონის შემცველი ნიმუშებისათვის, როგორიცაა ბამბის ფოთლები, ნიმუშის შეყვანის რაოდენობა მკაცრად უნდა იყოს 0.4 მგ -ზე ნაკლები, წინააღმდეგ შემთხვევაში PCR რეაქცია დაზარალდება.

ყველა პროდუქტი შეიძლება მორგებული იყოს ODM/OEM– ისთვის. Დეტალებისთვის,გთხოვთ დააწკაპუნოთ მორგებულ სერვისზე (ODM/OEM)

წინა: გმო მოსავლის მოპოვების და გამაძლიერებელი ნაკრები

შემდეგი: სისხლის პირდაპირი PCR ნაკრები

	დნმ ამოღებულია 5 მგ სიმინდის, ხორბლის, ბრინჯის, სოიოს და ბამბის ფოთლებისა და თესლისგან, შესაბამისად. დნმ გაძლიერდა PCR– ით კონკრეტული პრაიმერების გამოყენებით. საერთო ჯამში 20 μl გამხსნელიდან 6 μl დნმ დატვირთულია თითო ზოლზე. 1: პოზიტიური კონტროლის გენომი; 2: დატოვეთ ნიმუშები; 3: თესლის ნიმუშები; 4: NTC; 5: D2000 პრაიმერი
	M: TIANGEN მარკერი D2000; 1: პოზიტიური კონტროლი; 2-7: გამხმარი სისხლის ლაქების რაოდენობა ფილტრის ქაღალდზე არის 1-6 შესაბამისად; 8: უარყოფითი კონტროლი. 3 მმ -იანი პანჩერი გამოიყენეს გამხმარი სისხლის ლაქები ფილტრის ქაღალდიდან, როგორც მასალის ექსტრაქციის მასალად. საერთო ჯამში 20 μl გამხსნელიდან 6 μl დნმ დატვირთულია თითო ზოლზე.
	M: TIANGEN მარკერი D2000; 1: პოზიტიური კონტროლი (გენომური დნმ იყო გამოყენებული როგორც შაბლონი); 2-7: დამატებული სისხლის რაოდენობაა 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl და 60 μl, შესაბამისად; 8-13: დამატებული სისხლის რაოდენობაა 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl და 60 μl, შესაბამისად; 14: NTC. 6 μl დნმ სულ 20 μl გამხსნელიდან დატვირთულია აგაროზის გელზე.

Q: არ არის გამაძლიერებელი ზოლები

A-1 შაბლონი

■ შაბლონი შეიცავს ცილის მინარევებს ან Taq ინჰიბიტორებს და სხვ. —— გაასუფთავეთ დნმ შაბლონი, ამოიღეთ ცილის მინარევები ან ამოიღეთ დნმ შაბლონი გამწმენდი ნაკრებებით.

Temp შაბლონის დენატურაცია არ არის სრულყოფილი —— სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

■ შაბლონის დეგრადაცია —— შაბლონის ხელახლა მომზადება.

A-2 პრაიმერი

Prim პრაიმერების დაბალი ხარისხი-პრაიმერის ხელახალი სინთეზი.

■ პრაიმერის დეგრადაცია - მაღალი კონცენტრაციის პრაიმერების მცირე მოცულობად გადანაწილება შესანახად. მოერიდეთ მრავალჯერადი გაყინვას და გალღობას ან 4 ° C ხანგრძლივ კრიოპრეზერვაციას.

Prim პრაიმერების არასწორი დიზაინი (მაგ. პრაიმერის სიგრძე არ არის საკმარისი, დიმერი ჩამოყალიბებულია პრაიმერებს შორის და ა.შ.)

A-3 მგ²⁺კონცენტრაცია

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

Ne გაცხელების მაღალი ტემპერატურა გავლენას ახდენს პრაიმერისა და შაბლონის შეკავშირებაზე. --— შეამცირეთ გაცხელების ტემპერატურა და გააუმჯობესეთ მდგომარეობა 2 ° C გრადიენტით.

A-5 გაგრძელების დრო

Extension გახანგრძლივების მოკლე დრო —— გაზარდეთ გაფართოების დრო.

კითხვა: ცრუ დადებითი

ფენომენები: უარყოფითი ნიმუშები ასევე აჩვენებს სამიზნე მიმდევრობის ზოლებს.

PCR- ის A-1 დაბინძურება

Target სამიზნე მიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება - სიფრთხილით არ მოხდეს პიპეტით ნეგატიურ ნიმუშში სამიზნე მიმდევრობის შემცველი ნიმუშის გადატანა ან ცენტრიფუგის მილებიდან. რეაგენტები ან აღჭურვილობა უნდა იყოს ავტოკლავირებული არსებული ნუკლეინის მჟავების აღმოსაფხვრელად, ხოლო დაბინძურების არსებობა უნდა განისაზღვროს უარყოფითი კონტროლის ექსპერიმენტებით.

■ რეაგენტით დაბინძურება —— დატოვეთ რეაგენტები და შეინახეთ დაბალ ტემპერატურაზე.

A-2 Primer

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

Prim პრაიმერის არასათანადო დიზაინი და სამიზნე მიმდევრობას აქვს ჰომოლოგია არა სამიზნე მიმდევრობასთან. —— პრაიმერების ხელახალი დიზაინი.

კითხვა: არასპეციფიკური გაძლიერება

ფენომენები: PCR გამაძლიერებელი ზოლები შეუსაბამოა მოსალოდნელ ზომასთან, დიდი ან პატარა, ან ზოგჯერ ხდება სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.

A-1 პრაიმერი

Prim პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა

—— ხელახლა დიზაინის პრაიმერი.

■ პრაიმერის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

A-2 მგ²⁺ კონცენტრაცია

M მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - Mg2+ კონცენტრაციის სწორად შემცირება: Mg ოპტიმიზაცია²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-3 თერმოსტაბილი პოლიმერაზა

En ფერმენტის ჭარბი რაოდენობა - ფერმენტის ოდენობის სათანადოდ შემცირება 0.5 U ინტერვალით.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

■ გამოცხობის ტემპერატურა ძალიან დაბალია--სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორეტაპიანი დადნობის მეთოდი

A-5 PCR ციკლი

PC ძალიან ბევრი PCR ციკლი —— შეამცირეთ PCR ციკლების რაოდენობა.

Q: Patchy ან ნაცხის შემსრულებლები

A-1 პრაიმერი—— ცუდი სპეციფიკა —— პრაიმერის ხელახალი დიზაინი, პრაიმერის პოზიციისა და სიგრძის შეცვლა მისი სპეციფიურობის გასაზრდელად; ან განახორციელოს ჩადგმული PCR.

A-2 თარგი დნმ

—— შაბლონი არ არის სუფთა —— გაასუფთავე თარგი ან ამოიღე დნმ გამწმენდი ნაკრებებით.

A-3 მგ²⁺ კონცენტრაცია

—— მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ მგ²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 dNTP

—— dNTP– ების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ dNTP– ის კონცენტრაცია

A-5 გამოცხობის ტემპერატურა

—— ძალიან დაბალი დალუქვის ტემპერატურა —— სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა

A-6 ციკლი

—— ძალიან ბევრი ციკლი —— ციკლის ნომრის ოპტიმიზაცია

კითხვა: რამდენი თარგი დნმ უნდა დაემატოს 50 μl PCR რეაქციის სისტემაში?

კითხვა: როგორ გავაძლიეროთ გრძელი ფრაგმენტები?

პირველი ნაბიჯი არის შესაბამისი პოლიმერაზის არჩევა. რეგულარული Taq პოლიმერაზა არ შეიძლება კორექცია 3'-5 'ეგზონუკლეაზის აქტივობის არარსებობის გამო, ხოლო შეუსაბამობა მნიშვნელოვნად შეამცირებს ფრაგმენტების გაფართოების ეფექტურობას. ამრიგად, რეგულარული Taq პოლიმერაზა ვერ ახერხებს 5 კბ -ზე მეტი სამიზნე ფრაგმენტების ეფექტურად გაძლიერებას. Taq პოლიმერაზა სპეციალური მოდიფიკაციით ან სხვა მაღალი ერთგულების პოლიმერაზით უნდა შეირჩეს გაფართოების ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად და ხანგრძლივი ფრაგმენტის გაძლიერების საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად. გარდა ამისა, გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება ასევე მოითხოვს პრაიმერის დიზაინის შესაბამის კორექტირებას, დენატურაციის დროს, გაფართოების დროს, ბუფერულ pH- ს და სხვა. ჩვეულებრივ, პრაიმერები 18-24 bp– ით შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი მოსავლიანობა. შაბლონის დაზიანების თავიდან ასაცილებლად, 94 ° C ტემპერატურაზე დენატურაციის დრო უნდა შემცირდეს 30 წამამდე ან ნაკლები ციკლის განმავლობაში, ხოლო ტემპერატურის გაზრდის დრო 94 ° C- მდე გაძლიერებამდე 1 წუთზე ნაკლები. უფრო მეტიც, გაფართოების ტემპერატურის დადგენა დაახლოებით 68 ° C- ზე და გაფართოების დროის დაპროექტება 1 კბ/წთ სიჩქარის მიხედვით შეუძლია უზრუნველყოს გრძელი ფრაგმენტების ეფექტური გაძლიერება.

კითხვა: როგორ გავაუმჯობესოთ PCR- ის გამაძლიერებელი ერთგულება?

PCR- ის გაძლიერების შეცდომის მაჩვენებელი შეიძლება შემცირდეს დნმ -ის სხვადასხვა პოლიმერაზას მაღალი ერთგულების გამოყენებით. ყველა Taq დნმ პოლიმერაზას შორის, რაც აქამდე იქნა ნაპოვნი, Pfu ფერმენტს აქვს ყველაზე დაბალი შეცდომის მაჩვენებელი და ყველაზე მაღალი ერთგულება (იხ. თანდართული ცხრილი). ფერმენტების შერჩევის გარდა, მკვლევარებს შეუძლიათ კიდევ უფრო შეამცირონ PCR მუტაციის მაჩვენებელი რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციით, მათ შორის ბუფერული შემადგენლობის ოპტიმიზაციით, თერმოსტაბილური პოლიმერაზის კონცენტრაციით და PCR ციკლის ნომრის ოპტიმიზაციით.

ჩაწერეთ თქვენი შეტყობინება აქ და გამოგვიგზავნეთ

პროდუქტების კატეგორიები

რატომ ავირჩიეთ აშშ

დაარსების დღიდან ჩვენი ქარხანა ავითარებს პირველი მსოფლიო კლასის პროდუქტს პრინციპების დაცვით
ხარისხის პირველ რიგში. ჩვენმა პროდუქტებმა მოიპოვეს შესანიშნავი რეპუტაცია ინდუსტრიაში და ძვირფასი ნდობა ახალ და ძველ მომხმარებლებს შორის.

გამოკითხვა