2 × Taq Platinum PCR Mix

ულტრა სუფთა HotStart მაღალი ერთგულების თერმოსტაბილური დნმ პოლიმერაზა.

Taq Platinum დნმ პოლიმერაზა არის ქიმიურად მოდიფიცირებული HotStart Taq პოლიმერაზა 3′-5 ′ ეგზონუკლეაზის აქტივობით და 5′-3 ′ ეგზონუკლეაზის აქტივობით. Taq Platinum დნმ პოლიმერაზის ფერმენტული აქტივობა დაბლოკილია ოთახის ტემპერატურაზე. მისი აქტივობა შეიძლება გააქტიურდეს მხოლოდ 94 ° C ტემპერატურაზე 5-10 წუთის განმავლობაში, რითაც თავიდან ავიცილოთ არაპეციფიკური გაძლიერება, რომელიც გამოწვეულია პრაიმერის არასპეციფიკური ანელირების ან პრაიმერის დიმერის დაბალ ტემპერატურაზე PCR რეაქციის საწყის ციკლამდე და მნიშვნელოვნად გაზრდის მგრძნობელობას და PCR რეაქციის სპეციფიკა. გარდა ამისა, Taq Platinum დნმ პოლიმერაზას აქვს ძალიან მაღალი ერთგულება, რაც მეორეა Pfu პოლიმერაზასთან შედარებით. დნმ პოლიმერიზაციის გაფართოების სიჩქარე უფრო სწრაფია ვიდრე Pfu პოლიმერაზა და ამპლიფიკაციის ეფექტურობა უფრო მაღალია.

Კატა. არა	შეფუთვის ზომა
4992789	5x1 მლ
4992790	5 × 1 მლ

გამოგვიგზავნეთ ელ.წერილი ჩვენთვის

პროდუქტის დეტალი

ექსპერიმენტული მაგალითი

ხშირად დასმული კითხვები

პროდუქტის წარწერები

აქტივობის განსაზღვრა

1 ერთეული (U) Taq Platinum დნმ პოლიმერაზის აქტივობა განისაზღვრება, როგორც ფერმენტის ის რაოდენობა, რომელიც საჭიროა 10 ნმოლ დეოქსინუკლეოტიდის მჟავაში ხსნადი ნივთიერებებისთვის 74 ° C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში გააქტიურებული ორაგულის სპერმის დნმ-ის შაბლონის/პრაიმერის გამოყენებით.

Ხარისხის კონტროლი

SDS-PAGE გამოვლენის სიწმინდე 99%-ზე მეტია; ეგზოგენური ნუკლეაზის აქტივობა არ არის გამოვლენილი; ადამიანის გენომში ერთჯერადი ასლის გენი შეიძლება ეფექტურად გაძლიერდეს; ოთახის ტემპერატურაზე ერთი კვირის განმავლობაში შენახვისას მნიშვნელოვანი აქტივობა არ იცვლება.

ძირითადი ტექნიკური პარამეტრები

მას აქვს 5′-3 ′ ეგზონუკლეაზის აქტივობა და 3′-5 ′ ეგზონუკლეაზის აქტივობა და მისი ერთგულება არის Pfu პოლიმერაზას გვერდით. Taq Platinum Polymerase გაფართოების სიჩქარე უფრო სწრაფია ვიდრე Pfu პოლიმერაზა და გაძლიერების ეფექტურობა უფრო მაღალია. PCR პროდუქტების პირდაპირ მიბმა შესაძლებელია ბლაგვი ბოლომდე ან კლონირება TA ვექტორით. თუ კლონირების ეფექტურობა უნდა გაუმჯობესდეს, რეკომენდირებულია პირველი გაწმენდა და TA ვექტორში კლონირებამდე დაამატოთ 3'-dA გადახურვები.

ერთი მილის Taq Platinum MasterMix (ეროვნული მაღალტექნოლოგიური პროდუქტის სერტიფიცირება)

■ Taq Platinum MasterMix– მა გააუმჯობესა PCR რეაქციის სპეციფიკა და მგრძნობელობა და შეუძლია გაზარდოს რთული შაბლონები მაღალი GC შემცველობით, მეორადი სტრუქტურით და მსგავსი. სამიზნე შაბლონის 2 ასლის გაძლიერება შესაძლებელია, რაც უზრუნველყოფს უფრო ზუსტ ექსპერიმენტულ შედეგებს.

T უნიკალური Taq Platinum MasterMix ფორმულა მთელ რეაქციულ სისტემას ძალიან სტაბილურს ხდის და აქტიურობაზე არ იმოქმედებს განმეორებითი გაყინვა-დათბობა ან გრძელვადიანი შენახვა 4 ° C ტემპერატურაზე.

■ სტაბილურ და ეფექტურ წინასწარ მომზადებულ PCR შერეულ ხსნარს შეუძლია ოპერაცია გახადოს სწრაფი და მარტივი, მნიშვნელოვნად შეამციროს შრომის ინტენსივობა და შერჩევის შეცდომა. მაღალი ხარისხის PCR გამაძლიერებელი და ოპტიმიზატორი ასევე შედის ნარევში, რაც ამცირებს მოთხოვნებს PCR პირობებზე.

Product ამ პროდუქტს აქვს როგორც საღებავის შემცველი, ასევე საღებავის თავისუფალი სისტემა. საღებავის შემცველი MasterMix პროდუქტები შეიძლება პირდაპირ ელექტროფორეზირდეს PCR– ის შემდგომ, ჩატვირთვის ბუფერის დამატების გარეშე.

პროგრამები

მას შეუძლია შეცვალოს Pfu პოლიმერაზა, რათა გააძლიეროს მაღალი ერთგულების პროდუქტები რთული შაბლონებიდან, როგორიცაა გენომები, და შესაფერისია ისეთი პროგრამებისთვის, როგორიცაა გამოხატვის გენების კლონირება, ადგილის სპეციფიკური მუტაციები და ერთი ნუკლეოტიდური პოლიმორფიზმის ანალიზი (SNP) და ა.

სიფრთხილის ზომები PCR პრაიმერის დიზაინში:

პრაიმერის სიგრძე ჩვეულებრივ 20-25 მეტრია. თუმცა, ხანგრძლივი ფრაგმენტის PCR შესრულებისას, პრაიმერის სიგრძე უნდა გაიზარდოს 30-35 მერამდე.

Prim არ არსებობს დამატებითი წყვილი ორ პრაიმერს შორის, განსაკუთრებით ბოლო 3 ბაზისთვის 3 ′ ბოლოს.

■ GC შემცველობა უნდა იყოს 50-60%, და თავიდან ავიცილოთ ადგილობრივი მდიდარი GC ან AT. იმისათვის, რომ პრაიმერი და შაბლონი სტაბილურად იყოს შეკრული, თავიდან აიცილეთ AT მდიდარი სტრუქტურა 3 ′ ბოლოს.

■ მოერიდეთ პრაიმერს მეორადი სტრუქტურის შესაქმნელად.

■ შეარჩიეთ ორი პრაიმერი Tm ტემპერატურით ერთმანეთთან ახლოს.

PCR პრაიმერების Tm ღირებულების გაანგარიშება:

■ როდესაც პრაიმერი 20 მერზე ნაკლებია: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

■ როდესაც პრაიმერი 20 მეტრზე მეტია: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/ლ, სადაც L არის პრაიმერის სიგრძე.

■ დააყენეთ გამოცხობის ტემპერატურა (Tm-5) ° C.

PCR პრაიმერის შეყვანა

პრაიმერის შესაბამისი საბოლოო კონცენტრაცია შეიძლება შეირჩეს 0.1 μM და 1.0 μM შორის. პრაიმერის ძალიან დაბალი კონცენტრაცია იწვევს ამპლიფიკაციის პროდუქტების დაბალ მოსავალს, ხოლო პრაიმერის ძალიან მაღალი კონცენტრაცია უფრო მიდრეკილია არასპეციფიკური გაძლიერებისკენ. ჩვეულებრივ, როდესაც თარგი დნმ -ის ოდენობა დიდია ან რთული შაბლონური დნმ (მაგალითად, ადამიანის გენომის დნმ) გამოიყენება შაბლონად, პრაიმერის კონცენტრაცია უნდა იყოს დაბალი. როდესაც შაბლონის დნმ -ის რაოდენობა მცირეა ან მარტივი შაბლონური დნმ (მაგ., პლაზმიდური დნმ და ა.შ.) გამოიყენება როგორც შაბლონი, პრაიმერის კონცენტრაცია უნდა იყოს უფრო მაღალი.

ყველა პროდუქტი შეიძლება მორგებული იყოს ODM/OEM– ისთვის. Დეტალებისთვის,გთხოვთ დააწკაპუნოთ მორგებულ სერვისზე (ODM/OEM)

წინა: 2 × HotStart Taq PCR მიქსი

შემდეგი: 2 × Taq Plus PCR მიქსი

გამოიყენეთ გენომური დნმ, როგორც შაბლონი 1 კბ ფრაგმენტის გასაძლიერებლად. PCR რეაქციის შემდეგ, მიიღეთ 5 μl ელექტროფორეზის გამოვლენისთვის.

Q: არ არის გამაძლიერებელი ზოლები

A-1 შაბლონი

■ შაბლონი შეიცავს ცილის მინარევებს ან Taq ინჰიბიტორებს და სხვ. —— გაასუფთავეთ დნმ შაბლონი, ამოიღეთ ცილის მინარევები ან ამოიღეთ დნმ შაბლონი გამწმენდი ნაკრებებით.

Temp შაბლონის დენატურაცია არ არის სრულყოფილი —— სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

■ შაბლონის დეგრადაცია —— შაბლონის ხელახლა მომზადება.

A-2 პრაიმერი

Prim პრაიმერების დაბალი ხარისხი-პრაიმერის ხელახალი სინთეზი.

■ პრაიმერის დეგრადაცია - მაღალი კონცენტრაციის პრაიმერების მცირე მოცულობად გადანაწილება შესანახად. მოერიდეთ მრავალჯერადი გაყინვას და გალღობას ან 4 ° C ხანგრძლივ კრიოპრეზერვაციას.

Prim პრაიმერების არასწორი დიზაინი (მაგ. პრაიმერის სიგრძე არ არის საკმარისი, დიმერი ჩამოყალიბებულია პრაიმერებს შორის და ა.შ.)

A-3 მგ²⁺კონცენტრაცია

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

Ne გაცხელების მაღალი ტემპერატურა გავლენას ახდენს პრაიმერისა და შაბლონის შეკავშირებაზე. --— შეამცირეთ გაცხელების ტემპერატურა და გააუმჯობესეთ მდგომარეობა 2 ° C გრადიენტით.

A-5 გაგრძელების დრო

Extension გახანგრძლივების მოკლე დრო —— გაზარდეთ გაფართოების დრო.

კითხვა: ცრუ დადებითი

ფენომენები: უარყოფითი ნიმუშები ასევე აჩვენებს სამიზნე მიმდევრობის ზოლებს.

PCR- ის A-1 დაბინძურება

Target სამიზნე მიმდევრობის ან ამპლიფიკაციის პროდუქტების ჯვარედინი დაბინძურება - სიფრთხილით არ მოხდეს პიპეტით ნეგატიურ ნიმუშში სამიზნე მიმდევრობის შემცველი ნიმუშის გადატანა ან ცენტრიფუგის მილებიდან. რეაგენტები ან აღჭურვილობა უნდა იყოს ავტოკლავირებული არსებული ნუკლეინის მჟავების აღმოსაფხვრელად, ხოლო დაბინძურების არსებობა უნდა განისაზღვროს უარყოფითი კონტროლის ექსპერიმენტებით.

■ რეაგენტით დაბინძურება —— დატოვეთ რეაგენტები და შეინახეთ დაბალ ტემპერატურაზე.

A-2 Primer

G მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან დაბალია —— სათანადოდ გაზრდის მგ – ს²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

Prim პრაიმერის არასათანადო დიზაინი და სამიზნე მიმდევრობას აქვს ჰომოლოგია არა სამიზნე მიმდევრობასთან. —— პრაიმერების ხელახალი დიზაინი.

კითხვა: არასპეციფიკური გაძლიერება

ფენომენები: PCR გამაძლიერებელი ზოლები შეუსაბამოა მოსალოდნელ ზომასთან, დიდი ან პატარა, ან ზოგჯერ ხდება სპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები და არასპეციფიკური გამაძლიერებელი ზოლები.

A-1 პრაიმერი

Prim პრაიმერის ცუდი სპეციფიკა

—— ხელახლა დიზაინის პრაიმერი.

■ პრაიმერის კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - სათანადოდ გაზრდის დენატურაციის ტემპერატურას და ახანგრძლივებს დენატურაციის დროს.

A-2 მგ²⁺ კონცენტრაცია

M მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია - Mg2+ კონცენტრაციის სწორად შემცირება: Mg ოპტიმიზაცია²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-3 თერმოსტაბილი პოლიმერაზა

En ფერმენტის ჭარბი რაოდენობა - ფერმენტის ოდენობის სათანადოდ შემცირება 0.5 U ინტერვალით.

A-4 გამოცხობის ტემპერატურა

■ გამოცხობის ტემპერატურა ძალიან დაბალია--სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა ან გამოიყენეთ ორეტაპიანი დადნობის მეთოდი

A-5 PCR ციკლი

PC ძალიან ბევრი PCR ციკლი —— შეამცირეთ PCR ციკლების რაოდენობა.

Q: Patchy ან ნაცხის შემსრულებლები

A-1 პრაიმერი—— ცუდი სპეციფიკა —— პრაიმერის ხელახალი დიზაინი, პრაიმერის პოზიციისა და სიგრძის შეცვლა მისი სპეციფიურობის გასაზრდელად; ან განახორციელოს ჩადგმული PCR.

A-2 თარგი დნმ

—— შაბლონი არ არის სუფთა —— გაასუფთავე თარგი ან ამოიღე დნმ გამწმენდი ნაკრებებით.

A-3 მგ²⁺ კონცენტრაცია

—— მგ²⁺ კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ მგ²⁺ კონცენტრაცია: ოპტიმიზაცია Mg²⁺ კონცენტრაცია რეაქციების სერიით 1 მმ -დან 3 მმ -მდე 0.5 მმ ინტერვალით ოპტიმალური მგ -ის დასადგენად²⁺ კონცენტრაცია თითოეული შაბლონისა და პრაიმერისთვის.

A-4 dNTP

—— dNTP– ების კონცენტრაცია ძალიან მაღალია —— სათანადოდ შეამცირეთ dNTP– ის კონცენტრაცია

A-5 გამოცხობის ტემპერატურა

—— ძალიან დაბალი დალუქვის ტემპერატურა —— სათანადოდ გაზარდეთ გაცხელების ტემპერატურა

A-6 ციკლი

—— ძალიან ბევრი ციკლი —— ციკლის ნომრის ოპტიმიზაცია

კითხვა: რამდენი თარგი დნმ უნდა დაემატოს 50 μl PCR რეაქციის სისტემაში?

კითხვა: როგორ გავაძლიეროთ გრძელი ფრაგმენტები?

პირველი ნაბიჯი არის შესაბამისი პოლიმერაზის არჩევა. რეგულარული Taq პოლიმერაზა არ შეიძლება კორექცია 3'-5 'ეგზონუკლეაზის აქტივობის არარსებობის გამო, ხოლო შეუსაბამობა მნიშვნელოვნად შეამცირებს ფრაგმენტების გაფართოების ეფექტურობას. ამრიგად, რეგულარული Taq პოლიმერაზა ვერ ახერხებს 5 კბ -ზე მეტი სამიზნე ფრაგმენტების ეფექტურად გაძლიერებას. Taq პოლიმერაზა სპეციალური მოდიფიკაციით ან სხვა მაღალი ერთგულების პოლიმერაზით უნდა შეირჩეს გაფართოების ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად და ხანგრძლივი ფრაგმენტის გაძლიერების საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად. გარდა ამისა, გრძელი ფრაგმენტების გაძლიერება ასევე მოითხოვს პრაიმერის დიზაინის შესაბამის კორექტირებას, დენატურაციის დროს, გაფართოების დროს, ბუფერულ pH- ს და სხვა. ჩვეულებრივ, პრაიმერები 18-24 bp– ით შეიძლება გამოიწვიოს უკეთესი მოსავლიანობა. შაბლონის დაზიანების თავიდან ასაცილებლად, 94 ° C ტემპერატურაზე დენატურაციის დრო უნდა შემცირდეს 30 წამამდე ან ნაკლები ციკლის განმავლობაში, ხოლო ტემპერატურის გაზრდის დრო 94 ° C- მდე გაძლიერებამდე 1 წუთზე ნაკლები. უფრო მეტიც, გაფართოების ტემპერატურის დადგენა დაახლოებით 68 ° C- ზე და გაფართოების დროის დაპროექტება 1 კბ/წთ სიჩქარის მიხედვით შეუძლია უზრუნველყოს გრძელი ფრაგმენტების ეფექტური გაძლიერება.

კითხვა: როგორ გავაუმჯობესოთ PCR- ის გამაძლიერებელი ერთგულება?

PCR- ის გაძლიერების შეცდომის მაჩვენებელი შეიძლება შემცირდეს დნმ -ის სხვადასხვა პოლიმერაზას მაღალი ერთგულების გამოყენებით. ყველა Taq დნმ პოლიმერაზას შორის, რაც აქამდე იქნა ნაპოვნი, Pfu ფერმენტს აქვს ყველაზე დაბალი შეცდომის მაჩვენებელი და ყველაზე მაღალი ერთგულება (იხ. თანდართული ცხრილი). ფერმენტების შერჩევის გარდა, მკვლევარებს შეუძლიათ კიდევ უფრო შეამცირონ PCR მუტაციის მაჩვენებელი რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციით, მათ შორის ბუფერული შემადგენლობის ოპტიმიზაციით, თერმოსტაბილური პოლიმერაზის კონცენტრაციით და PCR ციკლის ნომრის ოპტიმიზაციით.

ჩაწერეთ თქვენი შეტყობინება აქ და გამოგვიგზავნეთ

პროდუქტების კატეგორიები

რატომ ავირჩიეთ აშშ

დაარსების დღიდან ჩვენი ქარხანა ავითარებს პირველი მსოფლიო კლასის პროდუქტს პრინციპების დაცვით
ხარისხის პირველ რიგში. ჩვენმა პროდუქტებმა მოიპოვეს შესანიშნავი რეპუტაცია ინდუსტრიაში და ძვირფასი ნდობა ახალ და ძველ მომხმარებლებს შორის.

გამოკითხვა